In die differensiële bepaling van enterobakterieë en sommige vibrio's neem die Voges-Proskauer-reaksie 'n spesiale plek in. Die toets is gebaseer op die vermoë van bakterieë om glukose te fermenteer om asetoïen te vorm.
Die kern van die navorsingsproses
In mikrobiologie word die Voges-Proskauer-reaksie dikwels gebruik om te onderskei binne die Yersinia-familie van enterobakterieë (insluitend die patogene van pseudotuberkulose en enterokolitis), Escherichia coli en spoorvormende aërobe. Die resultaat word gevisualiseer deur die medium te kleur wanneer sekere reagense bygevoeg word.
Hierdie toets behoort aan die IMViC-reeks (afkorting van Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - 'n groep identifikasietoetse insluitend differensiële definisies:
- met indool, gebaseer op die afbreek van triptofaan in indool, gebruik in die teenwoordigheid van 'n Kovacs- of Ehrlich-reagens;
- gebruikmethylroth, of metielrooi, wat 'n gegewe pH bespeur as gevolg van glukosemetabolisasie;
- Voges-Proskauer-reaksies vir die opsporing van asetiel-metielkarbinol;
- benutting van sitraat met kleurverandering as gevolg van alkalisering van die medium.
Die kern van die proses is die visualisering van die teenwoordigheid van gediagnoseerde bakterieë as gevolg van die interaksie van asetoïen wat deur hulle gevorm word met bytende potas in die teenwoordigheid van suurstof. Asetiel-metielkarbinol word geoksideer na diasetiel, wat 'n helderrooi of pienk verbinding vorm. Verhoog die sensitiwiteit van die toets deur alfa-naftol in te voer voordat bytende potas bygevoeg word.
Toetsinstelling
Die formulering van die Voges-Proskauer-reaksie behels die voorlopige verbouing van mikroörganismes.’n Suiwer kultuur word op Clark se differensiële diagnostiese medium gesaai, waarvan’n variasie Clark se sous is (sonder die byvoeging van agar-agar). Of klaargemaakte medium word gebruik, of onafhanklik voorberei. Bestanddele sluit in:
- 5g peptoon;
- 5g glukose;
- 5g tweebasiese kaliumfosfaat;
- 1L distillaat.
Gedurende die studie word die kultuur met 'n steriele bakteriologiese lus in 'n vloeibare medium geënt. Hoeveelheid - 5 ml in 'n proefbuis plus kontrole. Inkubasie word vir twee dae by 'n temperatuur van 35-37 grade uitgevoer. Vervolgens word 'n studie van die Voges-Proskauer-reaksie in fases uitgevoer:
- 2, 5 ml souskultuur word na 'n steriele buis oorgeplaas.
- Voeg ses druppels alfa-naftol (5% alkoholoplossing) by.
- Voeg 40% by'n oplossing van bytende kalium in 'n hoeveelheid van 0,1 ml, of twee druppels.
- Roer word uitgevoer deur die proefbuis liggies te skud.
- Evalueer die resultaat na 15 minute vanaf die begin van die eksperiment.
'n Alternatiewe toetsmetode is oornag-inkubasie, waarvan die tyd tot 18 uur of tot 'n dag verminder word. Benewens hierdie metode word 'n uitdruklike toets ook gebruik: 'n kultuur word in 'n lus in 2 ml van die medium ingebring, vir ongeveer vier uur geïnkubeer, dan word reagense in 'n gelyke hoeveelheid van 2-3 druppels bygevoeg, gemeng en die resultaat word na tien minute geëvalueer.
Die beheer is een van die veroorsakende middels van longontsteking Klebsiella pneumoniae - stam atcc 13883.
Evaluering van die resultaat
Na die vereiste tyd na die byvoeging van die reagense (vanaf 5 tot 15 minute), moet 'n kersie-rooi kleur waargeneem word met 'n uitgesproke positiewe reaksie, rooi en pienk - met 'n swak positiewe reaksie. Geen verandering word as 'n negatiewe resultaat aangeteken nie.
Oormaat bytende potas in 'n oplossing kan 'n nabootsing van 'n positiewe reaksie gee, vlek in 'n koperkleur. In hierdie geval moet die negatiewe reaksie van die getoetste kolonie aangeteken word. Koperkleuring verskyn ook in gevalle waar die assessering 'n uur na die bekendstelling van die reagense gegee word.
Wanneer die resultaat geëvalueer word, moet in ag geneem word dat langdurige bewerking van die bestudeerde mikroörganismes (meer as drie dae) lei tot versuring van die medium, wat tot 'n verkeerde uitkoms van die studie kan lei. Die reaksie kan effens positief wees ofvals negatief.
Vereistes vir toetsreagense
Voges-Proskauer reagense moet voldoen aan vereistes soos korrekte konsentrasie, hoë suiwerheid en stabiliteit, wat bereik word deur behoorlike berging.
Gereed-vir-gebruik toetsstelle bevat tipies reagense vir 100 of meer gebruike en kom in plastiek- of getinte glasbottels. Kwaliteit word gereguleer deur die relevante dokumentasie.
