Hematologie-bloedontleders is die werkesels van kliniese laboratoriums. Hierdie hoëprestasie-instrumente verskaf betroubare RBC-, bloedplaatjie- en 5-komponent WBC-tellings wat limfosiete, monosiete, neutrofiele, eosinofiele en basofiele identifiseer. Die aantal nukleêre eritrosiete en onvolwasse granulosiete is die 6de en 7de aanwysers. Alhoewel elektriese impedansie steeds fundamenteel is vir die bepaling van totale selgetal en -grootte, het vloeisitometrie-tegnieke waardevol bewys in leukosietdifferensiasie en in die ondersoek van bloed op 'n hematologiese patologie-ontleder.
Evolusie van die ontleder
Die eerste outomatiese bloedkwantifiseerders wat in die 1950's ingestel is, was gebaseer op Coulter se beginsel van elektriese impedansie, waarinselle wat deur 'n klein gaatjie gaan, het die elektriese stroombaan gebreek. Dit was "prehistoriese" ontleders wat slegs die gemiddelde volume eritrosiete, gemiddelde hemoglobien en die gemiddelde digtheid daarvan getel en bereken het. Enigiemand wat al ooit selle getel het, weet dat dit 'n baie eentonige proses is, en twee laboratoriumassistente sal nooit dieselfde resultaat gee nie. Die toestel het dus hierdie veranderlikheid uitgeskakel.
In die 1970's het outomatiese ontleders die mark betree, wat in staat was om 7 bloedparameters en 3 komponente van die leukosietformule (limfosiete, monosiete en granulosiete) te bepaal. Vir die eerste keer is handmatige leukogramtelling geoutomatiseer. In die 1980's kon een instrument reeds 10 parameters bereken. Die 1990's het verdere verbeterings in leukosietdifferensiale gesien deur vloeimetodes gebaseer op elektriese impedansie of ligverstrooiingseienskappe.
Vervaardigers van hematologie-ontleders probeer dikwels om hul instrumente van mededingers se produkte te skei deur te fokus op 'n spesifieke pakket witbloedseldifferensiasie of plaatjieteltegnologieë wat gebruik word. Kenners in laboratoriumdiagnostiek voer egter aan dat die meeste modelle moeilik is om te onderskei, aangesien hulle almal soortgelyke metodes gebruik. Hulle voeg net bykomende kenmerke by om hulle anders te laat lyk. Byvoorbeeld, een outomatiese hematologie-ontleder kan leukosietverskille bepaal deur 'n fluoresserende kleurstof in die kern te plaas.selle en gloeihelderheidmetings. Die ander kan die deurlaatbaarheid verander en die tempo van absorpsie van die kleurstof registreer. Die derde is in staat om die aktiwiteit van die ensiem in 'n sel wat in 'n spesifieke substraat geplaas is, te meet. Daar is ook 'n volumetriese geleiding en verstrooiingsmetode wat bloed in sy "byna natuurlike" toestand ontleed.
Nuwe tegnologieë beweeg na deurvloeimetodes, waar selle om die beurt ondersoek word deur 'n optiese stelsel wat baie parameters kan meet wat nog nooit voorheen gemeet is nie. Die probleem is dat elke vervaardiger hul eie metode wil skep om hul identiteit te behou. Daarom presteer hulle dikwels op een gebied en bly agter in 'n ander.
Huidige toestand
Volgens kenners is alle hematologie-ontleders op die mark oor die algemeen betroubaar. Die verskille tussen hulle is gering en hou verband met bykomende kenmerke waarvan sommige dalk hou, maar sommige nie. Die besluit om 'n instrument te koop hang egter gewoonlik af van die prys daarvan. Alhoewel koste nie in die verlede 'n probleem was nie, is hematologie vandag besig om 'n baie mededingende mark te word en soms beïnvloed pryse (eerder as die beste beskikbare tegnologie) die aankoop van ontleders.
Die nuutste hoëwerkverrigting-modelle kan as 'n selfstandige hulpmiddel of as deel van 'n outomatiese multi-gereedskapstelsel gebruik word. Ten volle outomatiese laboratorium sluit in hematologie, chemie en immunochemie ontleders met outomatiese insette, uitsette en verkoelinginstellings.
Laboratorium-instrumente hang af van die bloed wat getoets word. Die verskillende tipes vereis spesiale modules. Die hematologiese ontleder in veeartsenykundige medisyne is opgestel om te werk met eenvormige elemente van verskeie dierspesies. Byvoorbeeld, Idexx se ProCyte Dx kan bloedmonsters van honde, katte, perde, bulle, frette, hase, gerbils, varke, proefkonyne en minivarke toets.
Toepassing van vloeibeginsels
Die ontleders is vergelykbaar in sekere gebiede, naamlik in die bepaling van die vlak van leukosiete en eritrosiete, hemoglobien en bloedplaatjies. Dit is gewone, tipiese aanwysers, grootliks dieselfde. Maar is hematologie-ontleders presies dieselfde? Natuurlik nie. Sommige modelle is gebaseer op impedansiebeginsels, sommige gebruik laserligverstrooiing, en ander gebruik fluoressensievloeisitometrie. In laasgenoemde geval word fluoresserende kleurstowwe gebruik, wat die unieke eienskappe van die selle vlek sodat hulle geskei kan word. Dit word dus moontlik om bykomende parameters by leukosiet- en eritrosietformules by te voeg, insluitend die tel van die aantal nukleêre eritrosiete en onvolwasse granulosiete. 'n Nuwe aanwyser is die vlak van hemoglobien in retikulosiete, wat gebruik word om eritropoïese en die onvolwasse fraksie van bloedplaatjies te monitor.
Vooruitgang in tegnologie begin verlangsaam namate hele hematologie-platforms na vore kom. Daar is nog steedstalle verbeterings. Byna standaard nou is 'n volledige bloedtelling met 'n telling van kerneritrosiete. Boonop het die akkuraatheid van bloedplaatjietellings toegeneem.
Nog 'n standaardfunksie van hoëvlakontleders is om die aantal selle in biologiese vloeistowwe te bepaal. Die tel van die aantal leukosiete en eritrosiete is 'n moeisame prosedure. Dit word gewoonlik met die hand op 'n hemositometer uitgevoer, is tydrowend en vereis vaardige personeel.
Die volgende belangrike stap in hematologie is die bepaling van die leukosietformule. As vroeëre ontleders net ontploffingselle, onvolwasse granulosiete en atipiese limfosiete kon merk, is dit nou nodig om hulle te tel. Baie ontleders noem hulle in die vorm van 'n navorsingsaanwyser. Maar die meeste groot maatskappye werk daaraan.
Moderne ontleders verskaf goeie kwantitatiewe maar nie kwalitatiewe inligting nie. Hulle is goed om deeltjies te tel en kan hulle kategoriseer as rooibloedselle, bloedplaatjies, witbloedselle. Hulle is egter minder betroubaar in kwalitatiewe skattings. Byvoorbeeld, die ontleder kan bepaal dat dit 'n granulosiet is, maar dit sal nie so akkuraat wees om sy stadium van rypwording te bepaal nie. Die volgende generasie laboratoriuminstrumente behoort dit beter te kan meet.
Vandag het alle vervaardigers die Coulter-impedansiebeginseltegnologie vervolmaak en hul sagteware ingestel tot die punt waar hulle soveel data as moontlik kan onttrek. In die toekoms, nuuttegnologieë wat die funksionaliteit van die sel gebruik, sowel as die sintese van sy oppervlakproteïen, wat sy funksies en stadium van ontwikkeling aandui.
Sitometrie-grens
Sommige ontleders gebruik vloeisitometriese metodes, veral CD4- en CD8-antigeenmerkers. Sysmex-hematologie-ontleders kom die naaste aan hierdie tegnologie. Uiteindelik behoort daar geen verskil tussen die twee te wees nie, maar dit vereis dat iemand die voordeel sien.
'n Teken van moontlike integrasie is dat wat as standaardtoetse beskou is, wat na vloeisitometrie oorgegaan het, besig is om 'n terugkeer in hematologie te maak. Dit sal byvoorbeeld nie verbasend wees as ontleders fetale RBC-tellings kan uitvoer nie, wat die handtegniek van die Kleinhauer-Bethke-toets vervang. Die toets kan deur vloeisitometrie gedoen word, maar die terugkeer daarvan na die hematologielaboratorium sal dit wyer aanvaarding gee. Dit is waarskynlik dat hierdie verskriklike ontleding in terme van akkuraatheid op die lang termyn meer in lyn sal wees met wat verwag moet word van diagnostiek in die 21ste eeu.
Die lyn tussen hematologie-ontleders en vloeisitometers sal waarskynlik vir die afsienbare toekoms verskuif namate tegnologie of metodologie vorder. 'n Voorbeeld is die retikulosiettelling. Dit is eers met die hand uitgevoer, toe op 'n vloeisitometer, waarna dit 'n hematologie-instrument geword het toe die tegniek geoutomatiseer is.
Vooruitsigte vir integrasie
Volgens kenners, sommige eenvoudigsitometriese toetse kan aangepas word vir die hematologie-ontleder. 'n Voor die hand liggende voorbeeld is die opsporing van gereelde subgroepe van T-selle, direkte chroniese of akute leukemie, waar alle selle homogeen is met 'n baie duidelike fenotipiese profiel. In bloedontleders is dit moontlik om die verstrooiingseienskappe akkuraat te bepaal. Gevalle van gemengde of werklik klein bevolkings met ongewone of meer afwykende fenotipiese profiele kan meer kompleks wees.
Sommige mense twyfel egter of hematologie-bloedontleders vloeisitometers sal word. Die standaardtoets kos baie minder en behoort eenvoudig te bly. As daar as gevolg van sy optrede 'n afwyking van die norm bepaal word, is dit nodig om ander toetse te ondergaan, maar die kliniek of dokter se kantoor moet dit nie doen nie. As komplekse toetse afsonderlik uitgevoer word, sal dit nie die koste van normale toetse verhoog nie. Kenners is skepties dat sifting vir komplekse akute leukemie of die groot panele wat in vloeisitometrie gebruik word vinnig na die hematologie-laboratorium sal terugkeer.
Vloeisitometrie is duur, maar daar is maniere om koste te verminder deur reagense op verskillende maniere te kombineer. Nog 'n faktor wat die integrasie van die toets in die hematologie-ontleder vertraag, is die verlies aan inkomste. Mense wil nie hierdie besigheid verloor nie, want hul winste het reeds afgeneem.
Die betroubaarheid en reproduseerbaarheid van vloeianalise-resultate is ook belangrik om te oorweeg. Metodes gebaseer opimpedansie, is werkesels in groot laboratoriums. Hulle moet betroubaar en vinnig wees. En jy moet seker maak dat hulle koste-effektief is. Hul krag lê in die akkuraatheid en reproduceerbaarheid van die resultate. En aangesien nuwe toepassings op die gebied van sellulêre sitometrie na vore kom, moet dit nog bewys en geïmplementeer word. Inlyn-tegnologie vereis goeie geh altebeheer en standaardisering van instrumente en reagense. Daarsonder is foute moontlik. Daarbenewens is dit nodig om opgeleide personeel te hê wat weet waarmee hulle besig is en waarmee hulle werk.
Volgens kenners sal daar nuwe aanwysers wees wat laboratoriumhematologie sal verander. Daardie instrumente wat fluoressensie kan meet, is in 'n baie beter posisie omdat hulle 'n hoër mate van sensitiwiteit en selektiwiteit het.
Sagteware, reëls en outomatisering
Terwyl die visioenêre na die toekoms kyk, word vervaardigers vandag gedwing om met mededingers te veg. Benewens die klem op verskille in tegnologie, onderskei maatskappye hul produkte met sagteware wat data bestuur en verskaf outomatiese validering van normale selle gebaseer op 'n stel reëls wat in die laboratorium gestel word, wat validering aansienlik bespoedig en personeel meer tyd gee om op abnormale gevalle te fokus..
Op die ontledervlak is dit moeilik om die voordele van verskillende produkte te onderskei. Om sagteware te hê wat 'n sleutelrol speel in die verkryging van die resultate van die ontleding, laat die produk tot 'n sekere mate uitstaan in die mark. Eerstens gaan diagnostiese maatskappye nabemark sagteware om hul besigheid te beskerm, maar dan besef hulle dat inligtingbestuurstelsels noodsaaklik is vir hul voortbestaan.
Met elke generasie ontleders verbeter die sagteware aansienlik. Nuwe rekenaarkrag verskaf baie beter selektiwiteit in die handberekening van die leukosietformule. Die moontlikheid om die hoeveelheid werk met 'n mikroskoop te verminder, is baie belangrik. As daar 'n akkurate instrument is, is dit genoeg om net patologiese selle op 'n hematologiese ontleder te ondersoek, wat die doeltreffendheid van die werk van spesialiste verhoog. En moderne toestelle laat jou toe om dit te bereik. Dit is presies wat die laboratorium nodig het: gebruiksgemak, doeltreffendheid en verminderde mikroskoopwerk.
Dit is kommerwekkend dat sommige kliniese laboratorium dokters hul pogings fokus op die verbetering van tegnologie eerder as om dit te optimaliseer om gesonde mediese besluite te neem. Jy kan die mees bisarre laboratoriuminstrument in die wêreld koop, maar as jy die resultate voortdurend nagaan, skakel dit die moontlikhede van die tegnoloog uit. Abnormaliteite is nie foute nie, en laboratoriums wat slegs die "Geen abnormale selle gevind"-resultaat van die hematologie-ontleder outomaties bekragtig, tree onlogies op.
Elke laboratorium moet kriteria definieer vir watter toetse hersien moet word en watter met die hand verwerk moet word. Dus word die totale hoeveelheid nie-geoutomatiseerde arbeid verminder. Daar is 'n tyd om met abnormaal te werkleukogramme.
Die sagteware laat laboratoriums toe om reëls op te stel vir outo-validering en identifikasie van verdagte monsters gebaseer op die ligging van die monster of studiegroep. Byvoorbeeld, as die laboratorium 'n groot aantal kankermonsters verwerk, kan die stelsel gekonfigureer word om outomaties bloed op 'n hematologie-patologie-ontleder te ontleed.
Dit is belangrik om nie net outomaties normale resultate te bevestig nie, maar ook om die aantal vals positiewes te verminder. Handmatige ontleding is tegnies die moeilikste. Dit is die mees arbeidsintensiewe proses. Dit is nodig om die tyd wat die laboratoriumassistent met die mikroskoop spandeer te verminder, en dit te beperk tot slegs abnormale gevalle.
Toerustingvervaardigers bied hoëprestasie-outomatiseringstelsels vir groot laboratoriums om te help om personeeltekorte te hanteer. In hierdie geval plaas die laboratoriumassistent die monsters in 'n outomatiese lyn. Die stelsel stuur dan die buise na die ontleder en verder vir verdere toetsing of na 'n temperatuurbeheerde "pakhuis" waar monsters vinnig geneem kan word vir bykomende toetsing. Outomatiese smeertoediening en kleurmodules verminder ook personeeltyd. Byvoorbeeld, die Mindray CAL 8000 hematologie-ontleder gebruik die SC-120 depperverwerkingsmodule, wat 40 µl monsters met 'n vrag van 180 skyfies kan hanteer. Alle glase word verhit voor en na kleuring. Dit optimaliseer kwaliteit en verminder die risiko van personeelbesmetting.
Graad van outomatisering inhematologie laboratoriums sal toeneem, en die aantal personeel sal afneem. Daar is 'n behoefte aan komplekse stelsels waarin 'n mens monsters kan plaas, werk kan verander en net kan terugkom om werklik afwykende monsters te hersien.
Die meeste outomatiseringstelsels is aanpasbaar vir elke laboratorium, met gestandaardiseerde konfigurasies wat in sommige gevalle beskikbaar is. Sommige laboratoriums gebruik hul eie sagteware met hul eie inligtingstelsel en anomale steekproefalgoritmes. Maar jy moet outomatisering vermy ter wille van outomatisering. Groot beleggings in die robotprojek van 'n moderne duur hoëtegnologie outomatiese laboratorium is tevergeefs weens die elementêre fout om die bloedtoets van elke monster met 'n abnormale resultaat te herhaal.
Outomatiese tel
Die meeste outomatiese hematologie-ontleders meet of bereken die volgende parameters: hemoglobien, hematokrit, rooibloedseltelling en gemiddelde volume, gemiddelde hemoglobien, gemiddelde selhemoglobienkonsentrasie, bloedplaatjietelling en gemiddelde volume, en leukosiettelling.
Hemoglobien word direk van 'n volbloedmonster gemeet deur 'n hemoglobien-sianometermetode te gebruik.
Wanneer 'n hematologie-ontleder ondersoek word, kan die telling van rooibloedselle, witbloedselle en bloedplaatjies op verskeie maniere gedoen word. Baie meters gebruik die elektriese impedansie-metode. Hyis gebaseer op die verandering in geleidingsvermoë wanneer selle deur klein gaatjies beweeg. Die groottes van laasgenoemde verskil vir eritrosiete, leukosiete en bloedplaatjies. Die verandering in geleidingsvermoë lei tot 'n elektriese impuls wat opgespoor en aangeteken kan word. Hierdie metode laat jou ook toe om die volume van die sel te meet. Bepaling van die leukosietformule vereis lisis van eritrosiete. Die verskillende leukosietpopulasies word dan deur vloeisitometrie geïdentifiseer.
Die Mindray VS-6800 hematologiese ontleder, byvoorbeeld, na blootstelling aan die monsters met reagense, ondersoek hulle op grond van laserligverstrooiing en fluoressensiedata. Om bloedselpopulasies beter te identifiseer en te onderskei, veral om abnormaliteite op te spoor wat nie deur ander metodes opgespoor word nie, word 'n 3D-diagram gebou. Die BC-6800 Hematology Analyzer verskaf data oor onvolwasse granulosiete (insluitend promielosiete, myelosiete en metamielosiete), fluoresserende selpopulasies (soos ontploffings en atipiese limfosiete), onvolwasse retikulosiete en geïnfekteerde eritrosiete bykomend tot standaardtoetse
In Nihon Kohden se MEK-9100K-hematologie-ontleder word bloedselle perfek in lyn gebring deur 'n hidrodinamies gefokusde vloei voordat dit deur die hoë-presisie impedansie-telpoort beweeg. Boonop skakel hierdie metode die risiko van hertelling van selle heeltemal uit, wat die akkuraatheid van studies aansienlik verbeter.
Celltac G DynaScatter laser optiese tegnologie laat jou toe om 'n leukosietformule in 'n byna natuurlike toestand te kry. BYDie MEK-9100K hematologie-ontleder gebruik 'n 3-hoek verstrooiingsdetektor. Vanuit een hoek kan u die aantal leukosiete bepaal, vanaf 'n ander kan u inligting kry oor die struktuur van die sel en die kompleksiteit van nukleochromatiendeeltjies, en van die kant af - data oor interne korreligheid en globulariteit. 3D grafiese inligting word deur Nihon Kohden se eksklusiewe algoritme bereken.
Vloeisitometrie
Uitgevoer vir bloedmonsters, enige biologiese vloeistof, verspreide beenmurgaspiraat, vernietigde weefsel. Vloeisitometrie is 'n metode wat selle kenmerk volgens grootte, vorm, biochemiese of antigeniese samestelling.
Die beginsel van hierdie studie is soos volg. Die selle beweeg om die beurt deur die kuvette, waar hulle aan 'n straal intense lig blootgestel word. Die bloedselle strooi lig in alle rigtings. Voorwaartse verstrooiing as gevolg van diffraksie korreleer met selvolume. Laterale verstrooiing (teen regte hoeke) is die gevolg van breking en kenmerk ongeveer die interne korreligheid daarvan. Vorentoe en sy verstrooiingsdata kan byvoorbeeld populasies van neutrofiele en limfosiete identifiseer wat in grootte en korreligheid verskil.
Fluoresentasie word ook gebruik om verskillende populasies in vloeisitometrie op te spoor. Monoklonale teenliggaampies wat gebruik word om sitoplasmiese en seloppervlak-antigene te identifiseer, word meestal met fluoresserende verbindings gemerk. Byvoorbeeld, fluoressensieof R-phycoerythrin het verskillende emissiespektra, wat dit moontlik maak om die gevormde elemente te identifiseer deur die kleur van die gloed. Die selsuspensie word geïnkubeer met twee monoklonale teenliggaampies, elk gemerk met 'n ander fluorochroom. Soos bloedselle met gebonde teenliggaampies deur die kuvette beweeg, prikkel die 488 nm-laser die fluoresserende verbindings op, wat veroorsaak dat hulle op spesifieke golflengtes gloei. Die lens en filterstelsel bespeur lig en sit dit om in 'n elektriese sein wat deur 'n rekenaar ontleed kan word. Verskillende elemente van die bloed word gekenmerk deur verskillende kant- en vorentoeverstrooiing en die intensiteit van die uitgestraalde lig by sekere golflengtes. Data wat uit duisende gebeurtenisse saamgestel is, word in 'n histogram versamel, ontleed en opgesom. Vloeisitometrie word gebruik in die diagnose van leukemie en limfome. Die gebruik van verskeie teenliggaampies maak voorsiening vir presiese selidentifikasie.
Die Sysmex-hematologie-ontleder gebruik natriumlaurielsulfaat om hemoglobien te toets. Dit is 'n nie-sianiedmetode met 'n baie kort reaksietyd. Hemoglobien word in 'n aparte kanaal bepaal, wat interferensie van hoë konsentrasies leukosiete tot die minimum beperk.
Reagense
Wanneer jy 'n bloedtoetsinstrument kies, oorweeg hoeveel reagense benodig word vir 'n hematologie-ontleder, sowel as hul koste- en veiligheidsvereistes. Kan dit by enige verskaffer of slegs by die vervaardiger gekoop word? Byvoorbeeld, Erba ELite 3 meet 20 parameters met net drie omgewingsvriendelik en gratissianied reagense. Die Beckman Coulter DxH 800- en DxH 600-modelle gebruik slegs 5 reagense vir alle toepassings, insluitend nukleêre eritrosiete en retikulosiettellings. ABX Pentra 60 is 'n hematologie-ontleder met 4 reagense en 1 verdunningsmiddel.
Die frekwensie van reagensvervanging is ook belangrik. Byvoorbeeld, die Siemens ADVIA 120 het 'n voorraad analitiese en waschemikalieë vir 1 850 toetse.
Outomatiese ontleder-optimering
Na die mening van kenners word te veel aandag gegee aan die verbetering van laboratoriuminstrumente en nie genoeg nie - om die gebruik van outomatiese en handtegnologieë te optimaliseer. Deel van die probleem is dat hematologie-laboratoriums opgelei is in anatomiese patologie eerder as laboratoriumgeneeskunde.
Baie spesialiste voer die funksies van verifikasie uit, nie interpretasie nie. Die laboratorium behoort 2 funksies te hê: om verantwoordelik te wees vir die resultate van die analise en om dit te interpreteer. Die volgende stap sal die praktyk van bewysgebaseerde medisyne wees. As daar, nadat 10 000 toetse uitgevoer is, geen bewyse is dat hulle nie outomaties met presies dieselfde resultate geverifieer kon word nie, moet dit nie gedoen word nie. Terselfdertyd, as 10 000 ontledings nuwe mediese inligting verskaf het, moet dit in die lig van nuwe kennis hersien word. Tot dusver is bewysgebaseerde praktyk op die aanvanklike vlak.
Personeelopleiding
Nog 'n probleem is om laboratoriumassistente te help om nie net die instruksies vir die hematologie-ontleder te bestudeer nie,maar ook om die inligting wat met die hulp daarvan ontvang is, te verstaan. Die meeste spesialiste het nie sulke kennis van tegnologie nie. Daarbenewens is die begrip van die grafiese voorstelling van data beperk. Die korrelasie daarvan met morfologiese bevindinge moet beklemtoon word sodat meer inligting onttrek kan word. Selfs 'n volledige bloedtelling word te kompleks, wat 'n groot hoeveelheid data genereer. Al hierdie inligting moet geïntegreer word. Die voordele van meer data moet geweeg word teen die bykomende kompleksiteit wat dit meebring. Dit beteken nie dat laboratoriums nie hoëtegnologievooruitgang moet aanvaar nie. Dit is nodig om dit te kombineer met die verbetering van mediese praktyk.
